Atrial Natriuretic Peptide Frameshift Mutation in Familial Atrial Fibrillation cd

Sekwencje DNA oglądano i analizowano za pomocą programu komputerowego Sequencher (Gene Codes) i identyfikowano mutację, która jest segregowana z migotaniem przedsionków. W celu sekwencjonowania pojedynczego allelu DNA od heterozygot, zmutowany allel oddzielono od allelu typu dzikiego za pomocą elektroforezy w żelu poliakrylamidowym. Próbki od osób kontrolnych przeszukiwano pod kątem mutacji przez denaturację wysokowydajnej analizy heterodupleksu do chromatografii cieczowej z zastosowaniem systemu analizy fragmentów DNA WAVE (Transgenomic). Zmutowany peptyd ANP i przeciwciało
Zaprojektowane na zamówienie przeciwciało poliklonalne przeciwko zmutowanej formie ANP (mANP) zostało wyprodukowane komercyjnie (Biochemikalia XXI wieku). Peptyd Ac-CYRITAREDKQGWA-OH, odpowiadający anomalnym resztom mANP, został zsyntetyzowany, oczyszczony do 96% przez wysokosprawną chromatografię cieczową i zweryfikowany przez sekwencjonowanie peptydów i spektroskopię masową. Skoniugowany peptyd wstrzyknięto królikom, służąc jako epitop do wytwarzania oczyszczonego przez powinowactwo przeciwciała poliklonalnego. Pełnej długości mANP (z 40 aminokwasami) zsyntetyzowano w ośrodku podstawowym do wykorzystania w opracowaniu testu radioimmunologicznego mANP i do doświadczeń z izolowanymi sercami.
Test radioimmunologiczny
Testy radioimmunologiczne opracowano dla obu mANP (z zastosowaniem opisanego powyżej przeciwciała poliklonalnego) i dla ANP typu dzikiego (z użyciem dostępnego w handlu przeciwciała [Phoenix Pharmaceuticals]). Szczegóły techniczne znajdują się w Dodatku Uzupełniającym. Oba przeciwciała znakowano jodem-125.
Swoistość wiązania przeciwciała anty-mANP wykazano, najpierw wytwarzając standardowe krzywe z różnymi ilościami syntetycznego mANP, a następnie mierząc próbki od osobników w kilku rozcieńczeniach dla oceny reaktywności krzyżowej. Krzywe standardowe wygenerowano dla obliczenia stężeń ANP i mANP, w pikogramach na mililitr, w próbkach od członków rodziny i osobników kontrolnych. Zakres standardowej krzywej wynosił 2 do 500 pg na mililitr zarówno dla ANP, jak i dla mANP. Wszystkie pomiary peptydów przeprowadzono w dwóch powtórzeniach, a wartości podano jako średnią z dwóch. Normalny zakres dla ANP na podstawie tego testu określono na 14 do 36 pg na mililitr spośród 100 próbek.
Do pomiaru stężenia B-peptydu natriuretycznego (BNP) (Shionogi) użyto komercyjnie dostępnego testu immunoradiometrycznego (patrz Dodatek dodatkowy). Krzywą kalibracji (zakres od 0 do 2000 pg na mililitr) skonstruowano ze standardowych roztworów BNP w celu oszacowania stężeń BNP w próbkach. Normalny zakres BNP przy użyciu tego testu określono na 8 do 16 pg na mililitr spośród 100 próbek.
Model z izolowanym sercem
Instytucjonalny komitet ds. Opieki nad zwierzętami przy Uniwersytecie Iowa zatwierdził wszystkie procedury badań na zwierzętach. Jednofazowe potencjały czynnościowe przedsionków i skuteczne okresy refrakcji mierzono w izolowanych, perfundowanych sercach uzyskanych od samców szczurów. Każdy zestaw pomiarów przeprowadzano w oddzielnych izolowanych sercach. Szczegóły przygotowania izolowanych kier są podane w Dodatku Uzupełniającym.
Po ustaleniu stabilnego preparatu perfundowanego serca tylne przedsionki zostały odcięte w celu odsłonięcia lewego i prawego przedsionka serca, a węzeł przedsionkowo-komorowy został mechanicznie zmiażdżony, co doprowadziło do dysocjacji przedsionkowo-komorowej.
[patrz też: tyłozgryz leczenie u dorosłych, fizjoterapia z elementami klinicznymi, badania prenatalne warszawa ]

Powiązane tematy z artykułem: badania prenatalne warszawa fizjoterapia z elementami klinicznymi tyłozgryz leczenie u dorosłych